本文標題："不復染切片反差太弱，電子顯微鏡照片結構會模糊"
發布者：yiyi ------ 分類: 行業動態 ------
人瀏覽過-----時間：2016-11-14 19:48:38
不復染切片反差太弱，電子顯微鏡照片結構會模糊
后固定
后固定一般用俄酸，超薄切片經鈾—鉛復染后電鏡觀察。但復
染除有模糊重要細節的危險外．復染溶液對細胞化學反應產物有劇
烈的作用。Lewis和Knight(1977)曾在腎上腺髓質進行乙酰膽堿酯
酶(ACHE)反應，一張切片不復染作對照，一張切片用枸櫞酸鉛室溫
染5mia，結果每個軸突周邊的大部分有增強的AChE染色。一張切片
用醋酸雙氧鈾酒精溶液60℃染10rain，大部分AChE反應產物從軸突
上脫掉。所以，電鏡酶細胞化學應避免進行復染，只有確證復染不
干擾其結果的情況下，才采用復染以提高反差。
不復染的切片反差太弱，電鏡照片結構模糊。Karnovsky(1964
)用亞鐵氰化鉀還原餓酸代替一般5我酸進行后固定，可獲得較好的
反差，避免了復染。后固定時配制3％亞鐵氰化鉀水溶液(現配現用
)和2％餓酸水溶液(常規電鏡保存液)，兩液等量混合，立即用于后
固定。4℃或室溫下固定時間在1h以內。時間太長，有的反應產物
也會被溶解。后固定后要充分漂洗，再保存于二甲呻酸鈉緩沖液中
，4℃可保存幾天再包埋。
脫水、包埋、超薄切片
1．脫水
按常規電鏡技術進行脫水，但脫水時間比常規要短些，尤其是
在低濃度酒精或丙酮中停留的時間要短些，以免某些反應產物被溶
解掉。
2．包埋
對于用倒扣包埋法進行電鏡酶細胞化學反應，一般在玻片上進
行孵育反應，脫水后，把包埋劑直接滴在光鏡下已確定的酶反應部
位進行滲透，再在2號膠囊中裝滿包埋劑，把膠囊倒扣在反應部位
進行聚合，聚合完后，可用二種方法把膠囊從玻片上取下來，一種
方法是把玻片放在酒精燈上烤，烤至合適溫度，
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