本文標題："落射熒光顯微鏡的使用方法-生物細胞圖像分析"
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落射熒光顯微鏡的使用方法-生物細胞圖像分析
在落射熒光照明時(指激發(fā)光從物鏡向下照射樣品，用
同個物鏡作為照明聚光器和收集熒光的物鏡)，還需要加
上一個雙色束分離器。激發(fā)光源發(fā)射的光通過激發(fā)濾片投射
到雙色束分離器上，雙色束分離器對短波長的激發(fā)光有很強
韻反射能為，但對較長波長的發(fā)射熒光卻能通過，因此就使
激發(fā)光和熒光分開，透過的殘余激發(fā)光被阻斷濾片進一步吸收。
熒光顯微鏡的使用方法
熒光顯微鏡的使用方法：
1．接通電源后，開動熒光顯微鏡的汞燈啟動裝置，點
燃高壓汞燈，點燃15分鐘后進行觀察。
2．根據(jù)觀察需要選擇一定的激發(fā)濾片，使之進入光
路，允許一定波長的光波通過，作為激發(fā)光源。
3．根據(jù)激發(fā)濾片選擇相應(yīng)的阻斷濾片進行觀察。
4．如利用高壓汞燈進行普通顯微鏡觀察和進行顯微鐃
攝影時，必須將吸收熱和紫外線濾片放入光路，并將中性濾
片同時推進光路，減低光強度。
5．關(guān)閉熒光顯微鏡后，如需再次使用，需待關(guān)閉電源
20分鐘后再重新啟動，否則造成汞燈霧化，縮短使用壽命。
實驗步驟
1．用矛簽刮下口腔粘膜上皮細胞涂于載片。
2．于涂有細胞的載片上滴一滴熒光染液。
3．加蓋片，注意防止氣泡發(fā)生。用少量指甲油把蓋片
邊緣封好，待指甲油干后，即可在熒光顯微鏡下觀察。
4．把用于紫外光的激發(fā)濾片、雙色束分離器／內(nèi)裝阻
斷濾片的組合塊置于光路。用40倍或100倍熒光油浸物鏡可
觀察細胞核記錄細胞核發(fā)射何種顏色的熒光。
5．再換入紫或藍光的組合塊，觀察線粒體并記錄發(fā)何
種顏色的熒光，特別注意線粒體呈何種形狀。
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